Resumen:
Las rocas representan el principal refugio para la vida en algunos de los ambientes más extremos del planeta, como el antártico. Las comunidades microbianas que habitan el interior de las rocas se conocen como endolíticas. Estos microorganismos son capaces de colonizar grietas, poros y fisuras de las rocas así como modificarlas, directa o indirectamente, mediante procesos físicos y químicos. A escala global, estas interacciones afectan los ciclos de los elementos de la biósfera. Nuestro trabajo tiene como objetivo caracterizar la diversidad funcional de bacterias endolíticas antárticas, en concreto, en cuanto a los sistemas involucrados en la homeostasis de metales. Por otro lado, determinar la capacidad de las bacterias para producir pigmentos y evaluar si su síntesis está relacionada a la tolerancia a metales, como otro factor de protección frente a las condiciones del ambiente. Al momento hemos aislado e identificado 76 bacterias cultivables provenientes de dos muestras de rocas antárticas, identificadas como andesitas basálticas. Como se esperaba, el número de unidades formadoras de colonia fue de varios órdenes de magnitud menor que los obtenidos en otro tipo de muestras ambientales del lugar. Se encontraron representantes de Alpha, Beta y Gammaproteobacteria, Actinobacteria, Bacteroidetes, Cyanobacteria y Deinococcus-Thermus, de 22 géneros distintos. Asimismo, muchos aislamientos mostraron una baja identidad de secuencia con respecto a aquellas disponibles en las bases de datos públicas, lo que puede estar indicando la novedad de los microrganismos que colonizan este nicho. Además, detectamos aislamientos resistentes a Cu(II) 1mM, Mn(II) 3mM, algunos a Ni(II) y Zn(II) 1mM, Ag(I) 50μM y Co(II) 200μM, e incluso, los niveles de tolerancia de las bacterias se relacionaron con las abundancias de los distintos metales en las muestras de roca. Interesantemente, la mayoría de los aislamientos fueron pigmentados y casi todos estos pigmentos fueron identificados como carotenoides.

Contacto: v.carrasco02@gmail.com
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Resumen:
Las infecciones del tracto urinario (ITU) se encuentran entre las infecciones más comunes que afectan al ser humano. Entre los principales agentes etiológicos se encuentra Proteus mirabilis. Este patógeno está implicado en ITU complicadas, principalmente asociadas a la cateterización. P. mirabilis tiene la capacidad de formar biofilms, particularmente sobre superficies abióticas como catéteres. Diversos factores de virulencia están relacionados con la capacidad de formar biofilm incluyendo factores de adhesión, captación de hierro y movilidad, entre otros. El objetivo del trabajo fue evaluar el papel que cumplen genes relacionados con la virulencia y formación de biofilms en la capacidad de P. mirabilis de invadir células uroepitaliales y formar comunidades bacterianas intracelulares (CBI) como las descritas en Escherichia coli uropatogénica. Mutantes de una cepa patógena de P. mirabilis de origen clínico que exhibieron una capacidad alterada para formar biofilms fueron seleccionadas para su evaluación. Estas son defectivas para genes relacionados con adhesión (proteína fimbrial SteB y subunidad fimbrial mayor de la fimbria UCA),  sistemas de captación de hierro (ferritina y receptor Ton-B dependiente) y sistemas transportadores (PitA). Empleando células de vejiga humana T24, se realizaron ensayos de invasión con una MOI de 5 bacterias/célula, comparando con la cepa salvaje 2921. La cuantificación se realizó por recuento en placa. Aunque se observaron algunas diferencias en la capacidad de invasión celular de las mutantes con respecto a la cepa salvaje, estas no fueron significativas. Por otra parte, las mutantes fueron menos citotóxicas que la cepa salvaje presentando un mayor porcentaje de supervivencia celular. A partir de estos resultados se puede sugerir que los factores bacterianos implicados en la formación de biofilm de P. mirabilis no se relacionan con la invasividad celular y que existen otros mecanismos implicados en la misma.

Contacto: mgonzalez.iibce@gmail.com
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Resumen:
Las purinas son compuestos nitrogenados esenciales para la célula, componen ácidos nucleicos, algunos aminoácidos  y coenzimas, participan en el metabolismo energético (ATP, GTP) y son fuente de nitrógeno para muchos organismos. El transporte de purinas es mediado por transportadores sustrato-específicos. Todos los transportadores conocidos, desde bacterias a mamíferos y plantas, pertenecen a tres familias conservadas (NCS1, NAT/NCS2 y AzgA-like). El basidiomycota Phanerochaete chrysosporium tiene dos transportadores de purinas: PhU (NAT) y PhZ (AzgA-like). phU se regula transcripcionalmente como los homólogos caracterizados: se induce por sustratos y cuando estos son fuente de nitrógeno se induce además por carencia de nitrógeno y se reprime por amonio. En el caso de phZ a pesar de que sus sustratos son fuente de nitrógeno, la regulación del transportador parece estar ligada al anabolismo: es inducido por sustrato pero no por carencia y no es reprimido por amonio. Estas y otras diferencias lo hacen un candidato interesante para la caracterización funcional y estructural.   Las proteínas silvestres y mutantes expresadas en un mismo contexto genético, Aspergillus nidulans carece de transportadores propios fueron analizados: ubicación subcelular (fusión a GFP), crecimiento y transporte (uptakes competitivos con [³H]-hipoxantina). Los residuos a mutagenizar se seleccionaron mediante análisis comparativo de secuencias y modelado estructural por homología. PhZ transporta hipoxantina (Ki 0,2 μM); adenina, guanina y 8-azaguanina (80-90% de inhibición) y además es capaz de transportar xantina con equivalente porcentaje de inhibición. Mutantes de PhZ (L124M, T429P y A148) mostraron mayor resistencia al tóxico 8-azaguanina y otros (T131A) diferencias de localización subcelular. Concluimos que: PhZ es capaz de transportar xantina, diferenciándose funcionalmente de otras proteínas AzgA-like. L124, T429 y A148 interaccionan con el sustrato y T131 tendría una función relacionada a la regulación post-traduccional. PhU transporta los mismos sustratos que otros miembros NAT y determinamos que P456 es clave para su estructura.

Contacto: juli.dourron@gmail.com
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Resumen:
Varios estudios recientes reportan una red de comunicación bidireccional entre la microbiota del intestino (MI) y el sistema nervioso central. La MI en el adulto humano consiste mayoritariamente en bacterias y disrupciones en la homeostasis de la MI (disbiosis) han sido asociadas con diversas patologías y trastornos emocionales. Varios estudios han mostrado que la modificación de la MI por antibióticosen ratones provoca la aparición de comportamientos anormales en modelos animales de depresión y ansiedad. Sin embargo, un número limitado de estudios han examinado la relación microbiota-adicción. El objetivo de este trabajo fue comenzar a estudiar los efectos inducidos por el consumo de drogas de abuso, tales como la cocaína, en la estructura de la comunidad de la MI utilizando modelos animales que permiten fijar variables como dieta, tipo de droga y tiempo de consumo. Un grupo de ratas macho fue tratado durante 14 días con cocaína base (25 mg) volatilizada y administrada por inhalación pulmonar. Evidencias previas del laboratorio indican que cocaína base se vende adulterada con fenacetina y cafeína. Así, otro grupo de animales fue tratado con cocaína + fenacetina (25 mg) y cocaína + cafeína (25 mg) y con la combinación de los tres compuestos. Grupos control y tratados con fenacetina y cafeína volatilizadas fueron también incluidos. La materia fecal de los animales fue recogida luego de terminado el tratamiento y procesada para la extracción de ADN bacteriano. Análisis de fingerprinting basados en el espaciador intergénico del operón ribosomal (ITS) mostraron que los tratamientos indujeron cambios en la estructura comunitaria de la MI en relación a la estructura del grupo control, siendo éstos más evidentes con fenacetina. Aunque son necesarios más estudios para identificar las especies bacterianas afectadas, estos datos muestran un gran potencial para futuros estudios traslacionales en esta área emergente de la comunicación MI-cerebro.

Contacto: cpiccini@iibce.edu.uy
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Resumen:
Las infecciones causadas por Escherichia coli son uno de los mayores problemas sanitarios y económicos de los productores ganaderos mundialmente. Los patotipos E. coli enterotoxigénica y enteropatógenica se asocian a diarrea neonatal en terneros, mientras que E. coli enterohemorrágica y productora de toxina Shiga son importantes patógenos zoonóticos, siendo los bovinos su principal reservorio. La terapia antimicrobiana se utilizada para tratar enfermedades infecciosas. Lamentablemente, su uso indiscriminado se ha acompañado de un incremento en las resistencias, acarreando complicaciones en los tratamientos. Los antibióticos más comúnmente utilizados en animales son además ampliamente utilizados en la clínica humana y la transferencia de genes de resistencia a betalactámicos y fluoroquinolonas (FQ), debida a contaminación cruzada, es un problema cada vez más frecuente. Además, la creciente resistencia transferible a colistina ha emergido como una gran amenaza para la salud, ya que se utiliza en bovinos pero es de último recurso en infecciones multirresistentes en humanos. El objetivo de este trabajo consistió en evaluar los mecanismos de resistencia a antibióticos de E. coli de origen bovino y su papel como diseminadores de resistencia. El 36% de los aislamientos fueron resistentes a FQ y se constató la ocurrencia de multirresistencia. Se detectó la presencia de genes de resistencia a quinolonas qnrB2like y qnrS1 y se determinó resistencia a betalactámicos por betalactamsas de espectro extendido grupo CTXM14 y betalactamasas tipo AmpC. Por otro lado, se encontró el Integrón1 con arreglos que confieren resistencia a aminoglucósidos y trimetoprim. Finalmente, no se detectó la presencia del gen de colistina mcr1. La resistencia a antibióticos es un problema en la ganadería en Uruguay. E. coli de origen bovino puede jugar un papel importante en enfermedades en humanos, favoreciendo la trasferencia de resistencias inter-especies y obstaculizando los tratamientos. En este sentido, urge la implementación de la vigilancia en ambos ámbitos.

Contacto: aumpierrez@iibce.edu.uy
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Resumen:
La presencia de múltiples determinantes de resistencia a antibióticos en bacterias patógenas humanas es reconocida como una de las amenazas mas significativas a la salud pública. Aunque en ambientes naturales el rol principal de los antibióticos es el de servir como transductores en la comunicación e interacción entre microorganismos, la presión impuesta por su uso irracional, sea en el contexto clínico como productivo (a través de su empleo con fines profilácticos o como promotores del crecimiento animal), ha facilitado y promovido la selección, evolución, dispersión y proliferación de genes determinantes de resistencia a los mismos. Su dispersión y proliferación son además favorecidas por su localización en elementos mobilizables horizontalmente como ser plásmidos, transposones y sistemas de integrones. Estos últimos, estructuras modulares con el potencial de contener simultaneamente determinantes de resistencia a múltiples antimicrobianos. En este trabajo se analizaron aguas residuales domésticas y aguas residuales de un tambo experimental con el objetivo inicial de relevar la presencia de sistemas de integrones así como de determinantes genéticos de resistencia a antimicrobianos. Los resultados del mismo revelan la presencia en ambas matrices de integrasas de tipo 1 y 2 así como de integrones de clase 1 y 2. Asimismo, ensayos de PCR dirigidos a determinar la presencia de genes de resistencia a aminoglicósidos (aac, aph), β-lactámicos (bla_{CTX-KPC- OXA-TEM-VIM}), cloramfenicol (catA), trimetoprim (dhfrXII), macrólidos (ermF), streptotricina (sat), tetraciclina (tetL-M), vancomicina (vanA) así como a aminas cuaternarias (qacE-G) y mercurio (merA), en este caso por su potencial asociación a integrones clase 1, mostraron en ambas matrices con perfiles diferentes, productos de amplificación con los tamaños correspondientes esperados. Estos resultados preliminares remarcan la importancia del relevamiento ambiental de determinantes de resistencia a antimicrobianos así como la necesidad del aislamiento y la caracterización fenotípica y genómica de microorganismos portadores de integrones.

Contacto: Evehaller@gmail.com
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Resumen:
  Las enfermedades trasmitidas por alimentos (ETAs) constituyen un grupo heterogéneo de patologías asociadas al consumo de agua o alimentos que contienen una gran variedad de agentes infecciosos o no infecciosos nocivos para la salud de los seres humanos. La mayoría de los países que cuentan con sistemas para la vigilancia y notificación de estos casos han documentado durante las últimas décadas aumentos significativos en la incidencia de enfermedades causadas por microorganismos trasmitidos por los alimentos, incluyendo Salmonella spp., Campylobacter jejuni, Listeria monocytogenes y diferentes patotipos/virotipos de E. coli diarreogénicos (ECD). Hasta el momento se reconocen 6 virotipos clásicos en ECD: EPEC, ETEC, STEC, EIEC, EAEC, DAEC y aislamientos definidos híbridos, como la cepa O104:H4 responsable del brote de SUH en Alemania en 2004. Nuestro grupo de trabajo ha identificado la presencia de EPEC atípicos, STEC, EAEC y EIEC en casos de diarrea en niños y adolescentes. Muchos de estos agentes son trasmitidos por alimentos y se asocian a procesos severos como diarrea con sangre, colitis hemorragia y SUH. Hemos generado a lo largo de estos años datos sobre serogrupos, genotipos y perfiles de resistencia de diferentes ECD y estamos en condiciones de participar en trabajos de colaboración que traten de manera global el diagnóstico etiológico de los casos de ETA.    

Contacto: gvarela@higiene.edu.uy
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Resumen:
La listeriosis o enfermedad causada por Listeria monocytogenes, se sitúa entre las enfermedades transmitidas por alimentos de mayor relevancia para la salud pública y para la industria alimentaria, debido al impacto social y económico que tiene por la gravedad de su cuadro clínico. A pesar de los avances en su conocimiento, la listeriosis continúa siendo un problema importante por varios motivos. En primer lugar por su elevada letalidad, de hasta el 30% en los grupos de riesgo (neonatos, mujeres embarazadas, ancianos e inmunodeprimidos). En segundo lugar, porque L. monocytogenes presenta una serie de características que la convierten en un importante amenaza para las metas de inocuidad alimentaria: su ubicuidad en el medio ambiente hace que la diseminación a las instalaciones que elaboran alimentos sea frecuente y su gran capacidad de resistencia al frío, calor, acidez y salinidad favorecen su desarrollo durante el almacenamiento de los mismos. En tercer lugar, porque los grupos de riesgo constituidos por personas mayores e inmunocomprometidos están en continuo aumento. Por último, porque los brotes epidémicos de listeriosis son difíciles de investigar debido a que en general son pequeños, el periodo de incubación puede ser muy largo (hasta 70 días), y los pacientes se encuentran severamente enfermos o fallecidos lo que limita la posibilidad de obtener una historia alimentaria completa. ¿Que hemos hecho al respecto? Hemos estudiado unos 300 aislamientos de L. monocytogenes fundamentalmente de origen humano y alimentario realizando la  subtipificación molecular mediante determinación de serotipo y pulsotipo. Con ello hemos generado una base de datos importante que nos ha permitido conocer las cepas circulantes, colaborar con los organismos de control y con la industria en el estudio de brotes y en el control de esta bacteria en las plantas de procesamiento y en los establecimientos de venta de alimentos.

Contacto: imota@higiene.edu.uy
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Resumen:
La infección por el virus de la Hepatitis E (HEV) es una de las virosis emergentes que preocupa a la salud pública dada su compleja epidemiología. HEV se transmite principalmente por vía fecal-oral y presenta una mortalidad de hasta el 4 % en la población general y hasta el 20% en mujeres embarazadas. HEV se clasifica en 6 genotipos (G1-6), siendo los G1 y G2 antroponóticos, responsables de las epidemias en zonas endémicas. Los G3 y G4 se asocian a casos esporádicos en regiones no endémicas y países desarrollados y son considerados zoonóticos siendo los suidos los principales reservorios. En 2010 fueron reportados en Uruguay los primeros casos de infección por HEV en humanos, tratándose de casos autóctonos asociados al G3. Estas cepas resultaron estar filogenéticamente emparentadas con aislados suinos y humanos Europeos. Más recientemente se detectó el primer caso autóctono de infección por HEV humano G1 en Uruguay, filogenéticamente emparentado con cepas asiáticas. Este trabajo tiene como objetivo relevar a nivel molecular HEV en cerdos y jabalíes y para lo cual se investigó la presencia de HEV por PCR y Real Time PCR cuantitativa (RTqPCR) en un total de 140 animales. A su vez, se estudió la presencia de anticuerpos anti HEV en 380 muestras de suero de cerdos y jabalíes. En este trabajo se describe por primera vez un amplio relevamiento de HEV en suinos de Uruguay, y se reporta una alta seroprevalencia general de HEV. Se detectó una moderada frecuencia de infección en cerdos y jabalíes, con una notoria prevalencia del G3. Asimismo, por primera vez en América se identificó un aislado de HEV G1 epidémico en cerdos, considerado hasta el momento como exclusivamente antroponótico. Estos resultados sugieren que los cerdos y jabalíes son reservorios de HEV y como tales constituyen un riesgo de trasmisión zoonótica.

Contacto: smirazo@fcien.edu.uy
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Resumen:
Diversas formas infectantes de parásitos, como esporos, quistes, ooquistes, huevos o larvas, pueden encontrarse en los alimentos ya sea por contaminación de los mismos en cualquier etapa de su producción, recolección, conservación, preparación o consumo, o ya sea porque el alimento es parte en sí, del ciclo de transmisión del parásito, como ocurre con las carnes de diferentes orígenes. FAO/OMS establecieron en 2014 un ranking de parásitos trasmitidos por alimentos a nivel mundial de acuerdo a su impacto sobre la salud pública. De esos 24 agentes parasitarios hay 10 por lo menos que se diagnostican habitualmente en nuestro país. Sin embargo se desconoce su impacto real como enfermedades parasitarias transmitidas por alimentos debido a las numerosas dificultades para su control. Es necesario conocer bien aspectos íntimos de cada parásito, su ciclo y epidemiología para definir el riesgo asociado a su ingestión con alimentos, las formas de prevención y las estrategias de control. Es necesario desarrollar teconologías de diagnóstico de parásitos en alimentos. La notificación no es obligatoria para la mayoría de estas infecciones. Las migraciones, la expansión de hábitos alimentarios exóticos en cada región y las variaciones relacionadas con el cambio climático implican numerosos desafíos que habrá que enfrentar en los próximos años. Indudablemente la prevención, es decir las buenas prácticas asociadas al manejo integral de los alimentos, tanto a nivel familiar como industrial resultan fundamentales, y entre ellas destacamos la educación de la población sobre los riesgos y cómo prevenirlos.

Contacto: amacuna55@gmail.com
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Resumen:
Salmonella enterica es una de las principales causas de enfermedad transmitida por alimentos a nivel mundial, existiendo alrededor de 1500 serotipos diferentes. Estos serotipos se determinan en base a las distintas combinaciones de 46 antígenos O (somáticos) y 85 antígenos H (flagelares de primer y segunda fase). Clásicamente la tipificación de Salmonella se realiza mediante técnicas de aglutinación con anticuerpos, lo cual resulta caro y requiere una gran cantidad de tiempo y personal entrenado. Como alternativa se han propuesto métodos moleculares que, basándose en la secuencia de ADN, permiten una tipificación de Salmonella enterica comparable a la serotipificación. En este trabajo realizamos la tipificación de una colección de 58 cepas de Salmonella de origen humano y alimentario obtenidas en Bolivia entre 2008 y 2016, y comparamos los resultados obtenidos por el método clásico, por MLST usando el esquema de Achtman de 7 genes y por un método basado en 3 PCR múltiples que, mediante la amplificación de regiones variables de los genes wzx, fliC y fljB, permiten la determinación de 5 antígenos somáticos, 8 antígenos flagelares de primera fase y 7 de segunda fase, respectivamente. Los métodos de PCR permitieron la completa caracterización de 36 cepas de 9 serovares distintos. Al combinarlos con la secuenciación del gen FliC, se alcanzó la identificación de 15 serovares y un total de 54 cepas. Estos resultados fueron validados mediante técnicas serológicas y actualmente estamos realizando MLST a una selección de cepas para completar su caracterización. Con los métodos combinados se logró identificar 57 de 58 cepas: 55 corresponden a 16 serovares diferentes dentro de la subespecie enterica, y 2 a la subespecie diarizonae. Creemos que dichos métodos resultan actualmente más aplicables, sobre todo en laboratorios donde no existe la posibilidad de realizar serotipificación mediante métodos clásicos. Agradecimientos: Red CYTED-Salmoiber y CSIC  

Contacto: julietabisio@gmail.com
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Resumen:
El uso de microorganismos nativos con capacidad probiótica es una herramienta alternativa para el tratamiento y prevención de diversas patologías animales, como la diarrea neonatal de terneros (DNT). Los probióticos son seleccionados siguiendo una serie de criterios que permiten determinar in vitro e in vivo su potencial a partir de una colección de cepas. Las pruebas in vitro que se realizan incluyen evaluación de resistencia a condiciones similares a las encontradas en el tracto gastrointestinal, formación de biofilm, efecto antimicrobiano ante patógenos y adhesión a mucus y células epiteliales. El objetivo de este estudio fue evaluar la capacidad de colonización y persistencia en el tracto gastrointestinal de terneros de 4 cepas de Lactobacillus spp. nativas seleccionadas según su potencial in vitro. La evaluación de la persistencia implicó un ensayo in vivo de administración oral y cuantificación en heces por qPCR de las bacterias administradas, con primers dirigidos a cada especie. El estudio se realizó con 15 terneros (1 mes de vida), divididos en 5 grupos de 3 animales, de los cuales 4 grupos fueron de animales tratados con las 4 distintas cepas y el restante fue el grupo control, que recibió el vehículo sin bacterias. Se determinó que todas las cepas tuvieron una buena capacidad colonizadora, y particularmente la cepa L. reuteri 1.3B logró persistir en los 3 animales tratados hasta 5 días luego de finalizado el período de administración. Este resultado indica que las cepas fueron capaces de llegar de forma viable al intestino, siendo éste un requisito necesario para que puedan ejercer un efecto beneficioso en el hospedero.

Contacto: sofiafernandez03@gmail.com
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Resumen:
La Leucosis Bovina Enzoótica (LBE) es una enfermedad infecciosa de alta prevalencia en nuestro país que afecta principalmente al ganado lechero. Esta entidad se asocia a pérdidas económicas y un menor rendimiento productivo, existiendo una preocupación creciente sobre sus implicancias sanitarias. Es causada por un Deltarretrovirus denominado Virus de la Leucemia Bovina (VLB) que infecta principalmente linfocitos B. La LBE se caracteriza por presentar tres estadíos evolutivos: una primera fase de infección asintomática; una fase de linfocitosis persistente, y finalmente el desarrollo de una leucemia/linfoma a células B. La infección viral desencadena en el hospedero una respuesta inmune mantenida, caracterizada fundamentalmente por la presencia de anticuerpos específicos contra la glicoproteína viral de superficie gp51, tanto en suero como en leche. La seropositividad para estos anticuerpos es actualmente el método diagnóstico estándar. En el presente trabajo inicialmente se desarrolló y puso a punto un ELISA indirecto que detecta anticuerpos séricos anti-gp51, empleando una proteína recombinante producida en nuestro laboratorio. Su performance fue comparada con un ELISA comercial de referencia (VMRD Inc., WA). Fueron evaluados 1781 sueros bovinos provenientes de 7 tambos diferentes. En una segunda etapa se obtuvieron muestras pareadas de suero y leche de vacas en producción del tambo INIA-La Estanzuela en dos años consecutivos (231 y 248 muestras respectivamente). Estas fueron analizadas empleando nuestro test así como el kit VMRD. Los valores de especificidad y sensibilidad para nuestro ELISA en suero fueron de 0,96 y 0,94 respectivamente, mientras que para las muestras de leche los resultados mostraron una especificidad de 0,99 y una sensibilidad de 0.95. El test desarrollado en nuestro laboratorio mostró resultados comparables con el test de referencia, tanto empleando muestras de suero como de leche. Cabe destacar que el diagnóstico en muestras de leche respresenta una ventaja sanitaria, logistica y económica.

Contacto: andres.addiego@gmail.com
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Resumen:
La Leucosis Bovina Enzoótica (LBE) es una enfermedad causada por el Virus de la Leucemia Bovina (VLB) que afecta al ganado vacuno. En Uruguay se estima que más de un 50% del ganado lechero está infectado con VLB. La infección por VLB causa pérdidas en el sector productivo asociadas a: muerte por linfosarcoma, disminución de producción y calidad de la leche, incremento en intervalo interparto, mayor índice de refugos. Se han reportados varios trabajos intentando desarrollar inmunógenos que generen respuestas protectoras contra la infección por VLB, sin embargo, hasta el momento no existe en el mercado ninguna vacuna comercial que asegure una protección eficiente contra la infección por VLB.  El objetivo general de este trabajo es producir y caracterizar nuevos inmunógenos contra el VLB mediante la expresión de sus dos proteínas más inmunogénicas: Gag y Env, en un sistema de expresión eucariota. Por otra parte, nos interesa caracterizar la respuesta inmune humoral y celular frente a estos inmunógenos en un modelo murino.  Para ello proponemos producir “Virus Like Particles” (VLPs) que contengan la proteína Gag en su interior y la glicoproteína Env en la superficie de la partícula, las cuales presentarían y activarían al sistema inmune en condiciones similares a las existentes en los viriones infectantes, pero sin la capacidad infecciosa de estos. Por otro lado, introduciremos mutaciones aminoacídicas en el dominio de inmunosupresión de la glicoproteína Env, con el objetivo de estudiar su contribución en la modulación de la respuesta inmune antiviral. Al final de este proyecto esperamos contar con un conjunto de productos con capacidad de activar una respuesta inmune efectiva y mantenida contra el VLB con potencial aplicación para el diseño racional de vacunas eficaces, lo cual podría representar un aporte mayor en el desarrollo de programas de erradicación de esta enfermedad.

Contacto: nolivero@pasteur.edu.uy
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Resumen:
De las especies de hongos existentes en la tierra, se estima que muy pocas son conocidas actualmente y sólo un 5% han sido investigadas. Resulta interesante la bioprospección en ambientes poco explorados, con condiciones no tan favorables para la vida, donde puedan encontrarse cepas no identificadas que hayan desarrollado mecanismos adaptativos diferentes para superar las condiciones adversas. Debido a las condiciones extremas, los microorganismos del continente antártico y las islas vecinas han adquirido estrategias de adaptación únicas para poder sobrevivir. Aunque se han descrito nuevos grupos microbianos provenientes de la Antártida, las investigaciones realizadas con eucariotas, en particular con hongos son minoría, y son de utilidad tanto para estudios de biodiversidad así como de diversas aplicaciones. Comparado a los biomas templados, se conoce muy poco acerca de la diversidad fúngica de hongos de madera y la descomposición en ambientes polares. Algunos trabajos previos han demostrado que los hongos son importantes descomponedores a pesar de las condiciones ambientales extremas. Con el objetivo de avanzar en el conocimiento de la biología de hongos y ecología en la Antártida en el presente trabajo se realizó el aislamiento de hongos filamentosos a partir de muestras de madera colectadas en distintos puntos de la Isla Rey Jorge en la Antártida durante las campañas 2016 y 2017. Asimismo se realizó la identificación molecular de los aislamientos obtenidos mediante extracción de ADN, amplificación por PCR de la región ITS, secuenciación de dichos productos de amplificación y comparación con bases de datos. Dentro de la cepas estudiadas se identificaron algunas novedosas en este tipo de muestra y otras frecuentemente encontradas en muestras de madera provenientes de otras regiones de la Antártida, como las pertenecientes a la especie Pseudogymnoascus destructans.   Agradecimientos: Instituto Antártico Uruguayo, PEDECIBA QUÍMICA, ANII.

Contacto: felipeclavijo.94@gmail.com
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Resumen:
La salmonelosis es una de las causas más frecuentes de enfermedades transmitidas por alimentos en todo el mundo y los alimentos de origen animal son la fuente principal. Basándonos en los datos nacionales y en los existentes a nivel mundial obtenidos de revisiones bibliográficas nos propusimos el desarrollo de una cepa vacunal recombinante polivalente que posibilite la protección contra los 5 principales serotipos de Salmonella definidos a partir de este análisis (Enteritidis, Typhimurium, Newport, Infantis y Montevideo) por ser los de mayor prevalencia a nivel nacional y mundial. Para ello, proponemos utilizar una cepa viva atenuada del serovar Typhimurium (LVR01) y además seleccionar un conjunto de proteínas de superficie representativas de los serovares más prevalentes para ser expresados en la cepa vacunal. Con el fin de seleccionar los mejores candidatos para inducir una respuesta inmune, utilizamos un enfoque in silico.Seleccionamos, FlgK, IroE y RcsF como candidatos a ser incluidos en la vacuna ya que son proteínas que difieren respecto a su ortólogos en la cepa LVR01 pero muestran una alto porcentaje de identidad a nivel de aminoácidos entre serovares. Suponiendo que las proteínas de superficie comunes van a estar presentes en LVR01, la hipótesis es que estas 3 proteínas co-expresadas en la superficie de la vacuna podrían provocar una respuesta inmune protectora contra los 5 serovares.Ya hemos clonado estas proteínas fusionadas con el epítopo FLAG, en un plásmido bajo el control del promotor inducible en anaerobiosis, nirB. Hemos evaluado la expresión in vitro mediante Western Blot usando anticuerpos contra el epítopo FLAG y por real time PCR. El potencial de esta cepa recombinante de Salmonella para inducir una respuesta inmune  cruzada va a ser evaluado en un modelo murino. Esperamos obtener una cepa vacuna candidata para estudios adicionales en otras especies veterinarias.

Contacto: viperez@higiene.edu.uy
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Resumen:
  Los biofilms son comunidades microbianas, adheridas de forma irreversible a un sustrato y entre sí, inmersas en una matriz extracelular polimérica de producción propia. Proteus mirabilis es  una causa frecuente de infecciones del tracto urinario (ITU). Los biofilms favorecen la supervivencia de P. mirabilis en el tracto urinario brindando protección contra la acción del sistema inmunitario del hospedero y el efecto de antimicrobianos. El objetivo de este trabajo fue evaluar el papel de genes asociados a la formación de biofilms de P. mirabilis en la infectividad y en la formacion de biofilms. Para ello se emplearon 5 cepas mutantes en genes para ferritina,  un receptor Ton B-dependiente, una subunidad fimbrial mayor, la proteína fimbrial SteB y la proteína transportadora PitA, generadas por transposición a partir de una cepa salvaje de P. mirabilis. La infectividad se evaluó en el modelo de ITU ascendente en ratón y la bioarquitectura de los biofilms in vivo se determinó empleando el modelo de cámaras de difusión intraperitoneal en ratas. Las mutantes para ferritina y la proteína fimbrial SteB exhibieron una disminución significativa en la colonización del tracto urinario respecto a la cepa salvaje mientras que las otras cepas no presentaron diferencias significativas. La biomasa de los biofilms formados en  las cámaras intraperitoneales  por las cepas mutantes respecto a la salvaje fue baja y no presentó diferencias significativas al emplear la técnica semicuantitativa del Cristal Violeta. Por otro lado, los modelos 3D y los parámetros morfotopológicos generados por microscopía confocal mostraron que la cepa salvaje  forma biofilms maduros in vivo. En base a estos resultados se sugiere que los factores de P. mirabilis asociados a la formación de biofilms también pueden ser relevantes en el establecimiento de la ITU y que el ambiente y las superficies condicionan fuertemente la formacion de biofilms, en particular in vivo.

Contacto: anacaetano1017@gmail.com
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Resumen:
El interés en el estudio de bacterias promotoras del crecimiento vegetal (PCV), ha aumentado significativamente debido a su potencial uso como bioinoculantes con el fin de incrementar la productividad de cultivos de interés agronómico. Dentro de los mecanismos PCV se encuentran la capacidad de fijar biológicamente el N₂ atmosférico (diazotrofía), de solubilizar minerales (P,K), de producir fitohormonas y de controlar biológicamente fitopatógenos. Particularmente, las bacterias endófitas son aquellas capaces de colonizar los órganos internos de la planta sin causar infección aparente, siendo el modelo más estudiado Azoarcus sp. BH72. La misma está estrechamente relacionada con las cepas, Azoarcus indigens y Azoarcus communis, todas aisladas del pasto Kallar en Pakistán. Por otro lado, cepas del mismo género incluyendo Azoarcus sp. CIB y A. Olearius DQS-4T, han sido aisladas a partir de suelos o agua contaminada con compuestos aromáticos y poseen diferencias filogenéticas y metabólicas bien distintas a las asociadas a plantas. La cepa diazótrofa DQS-4T en particular, presenta características genéticas y fenotípicas muy similares a la cepa endófita BH72. En este contexto, el presente trabajo tiene como objetivo la caracterización bioquímica y molecular de las cepas del género Azoarcus: A. indigens, A. communis y Azoarcus sp. CIB y la evaluación de su actividad PCV. Para eso se evaluarán la presencia de mecanismos directos de PCV incluyendo la solubilización de P y K, la síntesis de Ácido Indol Acético (AIA) y la fijación biológica de N₂ atmosférico. Asimismo se evlauará la presencia de mecanismos posiblemente involucrados en la interacción con la planta incluyendo enzimas celulolíticas, proteasas y producción de biofilms. Adicionalmente se evaluará su efecto como inoculante mediante ensayos de PCV en plantas de sorgo dulce, caña de azúcar, arroz y festuca. Resultados de estas aproximaciones serán presentados.

Contacto: agustinbilat@gmail.com
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Resumen:
El  virus Orf (género Parapoxvirus, familia Poxviridae) es el responsable del Ectima Contagioso, una enfermedad zoonótica de gran importancia económica que afecta principalmente ovinos. Las reinfecciones con dicho virus son frecuentes y plantean la hipótesis de que la expresión de factores de virulencia que permiten evadir el sistema inmune tiene un rol esencial. Entre estos factores se encuentra la fosfatasa en tirosina del Virus Orf (OH1) capaz de afectar el estado de fosforilación del factor de transcripción STAT1 de la vía JAK/STAT, importante en la respuesta inmunitaria mediada por interferón. En este trabajo se buscó profundizar en el estudio del rol de OH1, buscando demostrar si OH1 interacciona directamente con STAT-1  in vitro y a nivel celular y  evaluando si esta interacción altera el nivel de fosforilación de STAT-1 y su translocación al núcleo. Para ello, se introdujo la actividad OH1 mediante dos estrategias, una clásica y otra utilizando un sistema de transducción basado en vectores herpéticos de tipo amplicón. Los resultados demostraron que OH1 inhibe de forma significativa tanto la translocación de STAT1 al núcleo como su fosforilación. Además, se generó el mutante catalítico OH1-C112S el cual constituye una herramienta para aislar potenciales sustratos. Utilizando este mutante se logró aislar a STAT-1 e identificar nuevos candidatos, entre ellos la proteína GAPDH, vinculada al metabolismo energético, el tráfico vesicular, y la respuesta mediada por interferón. Estos resultados abren nuevas hipótesis de trabajo que buscarán comprender como este tipo de factor de virulencia además de alterar la respuesta inmune también sería capaz de modular la actividad de enzimas implicadas en el metabolismo energético.

Contacto: dporley@fcien.edu.uy
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Resumen:
La presencia de coliformes en agua es ampliamente utilizada como indicador de contaminación fecal. En nuestro país, la legislación vigente incluye la determinación de coliformes fecales como uno de los parámetros más importantes para evaluar la calidad de los distintos cursos de agua. El método que se utiliza es el recomendado por Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater, el cual consiste en la filtración por membrana de la muestra y posterior incubación en medio mFC a 44,5 ± 0,2 ºC durante 24 ± 2 horas. Esta temperatura de incubación es importante para la selectividad del método y su estricto rango de variación es un factor crítico para su aplicación en el laboratorio. La robustez de un método analítico se define como una medida de la susceptibilidad del método a pequeños cambios que pueden ocurrir en la rutina del análisis. Para evaluar la robustez, se somete el método a pequeños cambios en el procedimiento y se evalúa su influencia en los resultados obtenidos. En este trabajo ensayamos la robustez del método para determinación de coliformes fecales al variar la temperatura de incubación, a cuatro temperaturas diferentes, realizando en paralelo un control a la temperatura de referencia. Para ello se sembraron diluciones de un cultivo puro de E. coli a tres niveles de concentración y muestras ambientales de playas de Montevideo a dos niveles de concentración. Los resultados se evaluaron mediante ANOVA para los casos en los que se cumplieron los supuestos de normalidad y homogeneidad de varianzas, y el test no paramétrico Kolmogorov-Smirnov en los casos puntuales que no se cumplieron estos supuestos. Los resultados obtenidos sugieren una tolerancia de ± 0,5 ºC respecto a la temperatura de referencia del método. Se obtuvieron diferencias significativas de recuento cuando se amplió el rango de incubación en 1,5 ºC.

Contacto: nataliarodriguezuy@gmail.com
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Resumen:
Los trabajadores rurales, en especial  de tambos y predios ganaderos, son en Uruguay los más frecuentemente afectados por Leptospira, en niveles variados de severidad. La infección es más común en épocas de intensa lluvia e inundaciones. Afecta especialmente a varones jóvenes por contacto de su piel dañada o aparentemente sana con orina de ganado bovino,  principal reservorio y fuente de infección en nuestro país. El diagnóstico de esta enfermedad en el hombre y en animales se ha realizado habitualmente por investigación de la respuesta inmune específica. A partir de 2010 nos propusimos completar el diagnóstico, con finalidad fundamentalmente epidemiológica, mediante el aislamiento y caracterización de las cepas infectantes del ser humano, del reservorio animal y del ambiente húmedo donde pueden sobrevivir extensamente.  Reportamos  los resultados obtenidos a partir del cultivo entre 2010 y 2016 de 302 muestras de sangre de pacientes presuntamente positivos, extraída en la breve fase leptospirémica inicial de la enfermedad, y de 36 muestras de aguas recogidas en su ambiente de trabajo. Los cultivos se realizaron en medios líquidos EMJH y Fletcher;  las bacterias reconocidas en microscopio de campo oscuro se identificaron inicialmente por técnicas de PCR hacia secuencias de ADN que codifican 16S ribosomal y LipL32, lipoproteína superficial de cepas patógenas.  La caracterización se complementó por  Multilocus Variable number tandem repeat Analysis MLVA, y en algunos casos por PFGE, MLST o secuenciación parcial del genoma. Seis de 8 aislamientos humanos pudieron ser identificados como serogrupos y serovares diversos de L. interrogans y L. kirschneri. Cinco de 7 aislamientos ambientales fueron de L. biflexa, uno de Leptonema illini y uno de Leptospira meyeri. Los pacientes con hemocultivo positivo compartían el perfil laboral pero tenían edades mayores que la media de los infectados,  cursaban enfermedad en general más severa y probablemente bacteriemias más intensas y por eso detectables.  

Contacto: pmeny@higiene.edu.uy
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Resumen:
Escherichia coli forma parte de la microbiota gastrointestinal nativa de humanos y animales de sangre caliente. Sin embargo, existen variantes de E. coli altamente adaptadas, las cuales han adquirido atributos de virulencia que le permiten establecerse en distintos nichos y causar enfermedad en individuos sanos. E. coli productora de toxina tipo Shiga (STEC) se asocia a enfermedades en los seres humanos, siendo los bovinos su principal reservorio natural. STEC puede causar desde diarreas leves hasta colitis hemorrágica (CH) y síndrome urémico hemolítico (SUH), desencadenando en algunos casos la muerte. El factor de virulencia más destacado de STEC lo constituyen las toxinas tipo Shiga 1 (Stx1) y 2 (Stx2), dentro de las cuales se identifican diferentes subtipos. El grupo Stx1 está subdividido en 3 variantes, mientras que el grupo Stx2 está compuesto por 7 variantes. Particularmente, los subtipos Stx2a y Stx2d se asocian a casos severos de CH y SUH. Por otro lado, las variantes Stx2b, Stx2c, Stx2f, Stx2g y las de Stx1, se asocian a diarreas leves, fiebre, dolores abdominales, entre otros. Stx2e, por su parte, está asociado a enfermedad en cerdos. El objetivo de este trabajo consistió en subtipificar las toxinas Shiga 1 y 2 de una colección de aislamientos de STEC obtenidos de muestras de necropsias y heces de terneros mediante la técnica de PCR múltiple. Hasta el momento hemos detectado los subtipos Stx2a, Stx2c, Stx2d y Stx1a. Asimismo, algunos aislamientos resultaron positivos para la variante usualmente asociada a cerdos, Stx2e. Ningún aislamiento analizado presentó la variante Stx2b. Se observó además la ocurrencia de más de una variante en un mismo aislamiento en simultáneo. Los resultados parciales demuestran la potencialidad de STEC aisladas en bovinos en Uruguay de causar enfermedad severa en el hombre, resaltando el riesgo zoonótico y la necesidad de realizar detección temprana de este patógeno.  

Contacto: debitoe@hotmail.com
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Resumen:
Introducción: Staphylococcus aureus es un patógeno humano reconocido capaz de adquirir mecanismos de resistencia para distintos antibióticos. La resistencia a oxacilina se debe principalmente a los genes mecA o mecC que determinan CIMs para oxacilina mayores a 4 mg/L (MRSA). La expresión de estos genes es variable y se han descrito aislamientos portadores del gen mecA con CIMs para oxacilina menores a 2 mg/L (fenotípicamente sensibles) denominadas OS-MRSA. Objetivo: comunicar la recuperación de 2 aislamientos de S. aureus con antibiotipos diferentes a partir del mismo caso clínico. Materiales y métodos: se trata de una niña con osteomielitis de rodilla derecha de la cual se obtuvieron 2 aislamientos de S. aureus, uno a partir del líquido articular y otro de sangre. Ambos se identificaron por VITEK y se clasificaron como MSSA (articular) y MRSA (hemocultivo). Los 2 aislamientos fueron enviados al Departamento de Bacteriología y Virología para completar su estudio. La presencia del gen mecA y de algunos genes de virulencia se hizo por PCR. Se realizó ensayo de disco-difusión para oxacilina (OXA) y cefoxitina (FOX) según CLSI. La comparación genética se estableció por SmaI-PFGE. Resultados: Los 2 aislamientos portaban el gen mecA, fueron positivos para ETs A y B, y negativos para PVL y TSST. Ambos mostraron halos de inhibición para OXA > 15 mm (sensibles) y para FOX < 19 mm (resistentes). El aislamiento identificado como MSSA mostró un doble halo para OXA compatible con el fenotipo de hetero-resistencia. Los perfiles PFGE fueron idénticos. Discusión y conclusiones: Este reporte informa sobre problemas para identificar correctamente aislamientos MRSA cuando se utiliza sistema VITEK. Es recomendable que en procesos severos producidos por cepas clasificadas como MSSA por este método se realicen estudios adicionales para identificar correctamente los cultivos MSSA, OS-MRSA o MRSA involucrados.  

Contacto: guillermina.giudice@gmail.com
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Resumen:
Streptococcus pneumoniae continúa siendo el principal agente etiológico de la neumonía comunitaria siendo responsable de aproximadamente 4 millones de muertes, en el mundo.  Nuestro grupo de investigación ha estado trabajando con un modelo murino de colonización nasofaríngea por neumococo serotipo 1. Estudios previos sugieren que IL-17A sería un mediador clave en los mecanismos inmunes responsables de la eliminación de dicha colonización. Por tanto, nos ha interesado dilucidar cuáles son los mecanismos efectores de IL-17A que están involucrados en dicha eliminación. Considerando que ya ha sido descrito  que IL-17A induce la producción de péptidos antimicrobianos, citoquinas y quimioquinas reclutadoras de neutrófilos a la zona de infección, decidimos estudiar la expresión de estos mediadores en  tejido linfoide asociado a nasofaringe (NALT). Nuestros resultados muestran que la producción, a nivel de ARN mensajero, de péptidos antimicrobianos y citoquinas proinflamatorias es similar en ambas cepas. Sin embargo, sí se observa una diferencia significativa en las citoquinas Il4 e Il10, siendo mayor la expresión en los ratones Il17a^-/- con respecto a WT. A su vez, en resultados preliminares obtenidos por citometría  de flujo, observamos un mayor reclutamiento de células T reguladoras (en muestras de NALT) y un menor reclutamiento de neutrófilos (en muestras de lavado nasofaríngeo) en los animales Il17a^-/-en comparación con la cepa salvaje. En suma, estos resultados  sugieren que un “apagamiento” de la respuesta inmune en los ratones Il17a^-/-, dado por una mayor presencia de células T reguladores y una mayor expresión de citoquinas como IL10, podrían favorecer el mantenimiento de la colonización nasofaríngea por neumococo. Estos resultados nos motivan a seguir investigando el mecanismo de acción de esta citoquina, ya que sigue siendo central encontrar el mecanismo molecular que determina que los animales deficientes en IL17A no sean capaces de controlar y eliminar la colonización nasofaríngea por neumococo.

Contacto: paulacespedes1@gmail.com
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Resumen:
Las nanopartículas son agregados de material de dimensiones nanométricas. Dichas dimensiones les otorgan mayor área superficial y propiedades mecánicas, químicas, eléctricas, ópticas, magnéticas, y electro y magneto-ópticas, diferentes a las de sólidos de la misma composición, pero de mayor tamaño. Estas propiedades particulares de las nanopartículas les atribuyen sus muy promisorias aplicaciones. En particular, las nanopartículas de plata son agregados de átomos de plata (Ag⁰) cuya característica principal es su eficiencia absorbiendo y dispersando la luz, debido a la Resonancia de Plasmón de Superficie. La absorción de la luz varía significativamente con el tamaño y forma, así como la distancia entre ellas. Estas propiedades ópticas permiten el uso de las partículas metálicas en diversas aplicaciones, como el desarrollo de biosensores, diagnóstico y tratamiento de cáncer, liberación controlada de fármacos, y como agentes antimicrobianos. En este trabajo se realizó la biosíntesis de nanopartículas de plata a partir del caldo extracelular de una cepa de Phanerochaete chrysosporium, evaluando distintas condiciones a nivel de la incubación del micelio con el agua y en la reacción de síntesis. Con las nanopartículas sintetizadas se determinó el potencial antimicrobiano mediante ensayos de determinación de Concentración Inhibitoria Mínima (CIM) frente a fitopatógenos pertenecientes a los géneros Xanthomonas, Fusarium, Penicillium, Rhizopus y Botrytis. Los resultados obtenidos permitieron determinar las mejores condiciones para realizar la biosíntesis de nanopartículas de plata a mayor escala. A su vez las nanopartículas presentaron valores de CIM muy inferiores a los de la solución de nitrato de plata, demostrando su gran potencial antimicrobiano frente a los fitopatógenos evaluados. Agradecimientos: APIPES (SUM), CSIC I+D 1500, PEDECIBA Química.

Contacto: bestevez@fq.edu.uy
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Resumen:
El sorgo (Sorghum bicolor L. Moench) es uno de los cereales más cultivados en el mundo. En Uruguay la producción de sorgo en el año 2015 - 2016 alcanzó las 520 mil toneladas con un área plantada de 170 mil hectáreas aproximadamente, siendo su principal destino la alimentación animal y la producción de biocombusibles. La infección de los cultivos con Fusarium spp. genera importantes pérdidas en el rendimiento de las cosechas. Además, algunas especies son capaces de producir micotoxinas, que ocasionan un riesgo para la salud animal y humana. El objetivo de este trabajo fue aislar e identificar las especies de Fusarium presentes en granos de sorgo. Se analizaron 38 muestras provenientes de distintos departamentos. Se inocularon 100 granos de cada muestra en medio agar papa dextrosa y se incubó a 25ºC durante 5 días. Luego se cuantificaron y aislaron las especies de Fusarium presentes. La identificación se realizó por métodos morfológicos y moleculares. El 87% de las muestras analizadas presentaron infección por Fusarium spp. (769 aislamientos correspondientes a 8 especies) observándose diferencias entre las muestras en cuanto a la composición y frecuencia de especies. Dentro de las especies de Fusarium, F. graminearum fue la mas frecuente (79%), seguida de F. nygamai (11%) y F. semitectum (6%). Estos hongos son importantes productores de micotoxinas, a la vez que F. graminearum y F. nygamai son especies fitopatógenas. Por esta razón sería de interés evaluar la capacidad toxicogénica de las cepas aisladas y la presencia de micotoxinas en los granos de sorgo.

Contacto: moliver24@gmail.com
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