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viernes
10:30 - 12:00 SBBM
Conferencia Inaugural SBBM Simposio SBBM_1: Biología celular y molecular
LINCing the Nucleus to the Cytoskeleton in Cell Polarity, Migration and Disease
 Expositor
Gregg Gundersen - Columbia University. NY (USA )
Simposio SBBM1: Biología celular y molecular
 Coordinador
Florencia Irigoín (Uruguay)
 Coordinador
José Sotelo - IIBCE (Uruguay)
 Coordinador
Gonzalo Ferreira - Universidad de la República. Medicina, Biofísica. Laboratorio Canales Iónicos (Uruguay)
Transporte y señalización a través de PPARγ de ácidos grasos nitrados (NO2-FA): rol de las proteínas de unión a ácidos grasos (FABPs)
 Expositora
María Lamas - UdelaR
Posible rol de SIRT6 en la respuesta inflamatoria
 Expositora
Mariana Bresque - IPMon
NC886 es epigénicamente reprimido en el cáncer de próstata y actúa como supresor de tumor a través de la inhibición del crecimiento celular.
 Expositor
Rafael Fort - UdelaR
| Conferencista invitado
LINCing the Nucleus to the Cytoskeleton in Cell Polarity, Migration and Disease (#0081)
Gregg Gundersen 1
1 - Columbia University. NY.
Resumen:
In virtually all cells the nucleus is positioned at a specific location. Disruption of nuclear position affects cell division, polarity, and migration and is associated with numerous diseases.  We use wounded fibroblast and myoblast monolayers as model systems to study the mechanisms of nuclear movement and positioning. We identified a novel nuclear adhesive structure composed of the LINC (linker of nucleoskeleton and cytoskeleton) complex proteins nesprin-2G and SUN2 that attaches the nucleus to actin cables to move the nucleus. As with cell-cell and focal adhesions, we find that this nuclear adhesion is reinforced by the binding of other proteins, including the actin bundling proteins FHOD1 and fascin.  Importantly, we find that the interaction of nesprin-2G with FHOD1 stimulates its actin bundling activity, suggesting that the nucleus actively participates in reorganizing the actin cytoskeleton. Mutations in LINC complex components and lamin A/C, which anchors the LINC complex, cause muscular dystrophies, lipodystrophies, ataxias and progeria. Using our model system, we find that expressing the disease variants of these proteins results in defects in nuclear positioning, cell polarization and migration. Interestingly, the defects in nuclear movement and cell polarization observed in progeria patient fibroblasts are also observed in fibroblasts from normal individuals over age 60. Treatments that reduce progeria expression or its abnormal farnesylation restore normal nuclear movement and cell polarization in both progeria and aged fibroblasts suggesting a common determinant for premature and normal aging.

Contacto: ggg1@cumc.columbia.edu
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| Póster | Oral - Si
Transporte y señalización a través de PPARγ de ácidos grasos nitrados (NO2-FA): rol de las proteínas de unión a ácidos grasos (FABPs) (#0290)
María Lamas Bervejillo 1; Gisela R. Franchini 2; Natalia M. Bottasso Arias 2; Juan Martin Marqués 3; Francisco Schopfer 4; Betina Córsico 2; Homero Rubbo Amonini 5; Ana M. Ferreira 6
1 - Laboratorio de Inmunología, DEPBIO, Facultad de Química, UdelaR. 2 - Instituto de Investigaciones Bioquímicas de La Plata, Facultad de Ciencias Médicas, Universidad Nacional de La Plata. 3 - LVR, Facultad de Medicina, UdelaR. 4 - Department of Pharmacology and Chemical Biology, University of Pittsburgh. 5 - Departamento Bioquímica, LOBBM, Facultad de Medicina, UdelaR. 6 - Laboratorio de Inmunología, IQB, Facultad de Ciencias, UdelaR.
Resumen:
Los nitroalquenos derivados de ácidos grasos poliinsaturados (NO2FA) son mediadores lipídicos, producidos endógenamente en contextos inflamatorios, capaces de modular la activación de varios tipos celulares. Esto resulta de su acción sobre distintas vías de señalización asociadas a la inflamación y al metabolismo lipídico. Entre otras, los NO2FA activan receptores nucleares de la familia PPAR, particularmente la isoforma PPARγ. Este trabajo buscó elucidar qué mecanismos moleculares y eventos celulares están ligados a la activación de PPARγ por NO2FA. Primeramente, demostramos que los NO2FA activan PPARγ en monocitos/macrófagos ya que indujeron la expresión de genes reporteros de PPARγ (la proteína de unión a ácidos grasos FABP4 y el receptor barrendero CD36) en forma dependiente del receptor (anulada por GW9662, inhibidor específico de PPARγ). Como FABP4 participa en el transporte intracelular de ácidos grasos, evaluamos si esta proteína podía unir y transportar NO2FA al núcleo, contribuyendo a la activación de PPARγ. Utilizando ensayos de desplazamiento competitivo de una sonda fluorescente, encontramos que in vitro los NO2FA son capaces de unirse a la FABP4 con una afinidad levemente menor que la de sus precursores no nitrados (µM). Esto podría permitir su unión a la FABP4 así como también su disociación frente a otro interactor con afinidad por el NO2FA, como PPARγ. Finalmente, utilizamos un inhibidor de FABP4 (BMS309403) para evaluar su papel en la activación de PPARγ mediada por NO2FA. Observamos que la activación de PPARγ por NO2FA fue interferida por el BMS309403 sugiriendo que FABP4 contribuye a dicha activación, posiblemente actuando como proteína transportadora. Actualmente estamos analizando por inmunofluorescencia el efecto de los NO2FA sobre la distribución celular de FABP4. Globalmente nuestros resultados plantean que los NO2FA podrían autorregular su transporte intracelular en monocitos/macrófagos a través de la inducción de una proteína capaz de transportarlos, FABP4, promovida por activación de PPARγ.

Contacto: mlamasber@gmail.com
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| Póster | Oral - Si
Posible rol de SIRT6 en la respuesta inflamatoria (#0370)
Mariana Bresque 1; Garat Pia 1; Bobba Natalia 1; Matalonga Jonathan 2; Dapueto Rosina 1; Galliussi German 1; Marmisolle Ines 3; Virginia López 1; Celia Quijano 3; Carlos Batthyany 1; Carlos Escande 1
1 - Institut Pasteur. 2 - Universidad de Barcelona. 3 - Facultad de Medicina.
Resumen:
A nivel mundial la preocupación por el sobrepeso y la obesidad toma cada vez más relevancia y Uruguay no es ajeno a esta problemática. Ambos, constituyen el principal factor de riesgo para el desarrollo de diabetes tipo II, enfermedades cardiovasculares y Síndrome Metabólico. Los orígenes de estas patologías incluyen la generación de resistencia a insulina y una inflamación sistémica crónica y estéril, donde el tejido adiposo (TA) presenta un estado disfuncional y proinflamatorio. Los principales contribuyentes al estado patológico del tejido son los preadipocitos, con un fuerte componente secretor proinflamatorio y células inmunes que infiltran el tejido, retroalimentando positivamente la respuesta inflamatoria. Nuestro grupo propone que SIRT6, una desacilasa de histonas que se encuentra unida a la cromatina, podría tener un rol en la respuesta inflamatoria. Presentaremos resultados in vitro e in vivo relacionados con la expresión, distribución, regulación y actividad enzimática de SIRT6 en respuesta a estímulos proinflamatorios. Los estudios in vitro incluyen el estudio de macrófagos, células con fenotipo secretor senescentes y preadipocitos. Los in vivo consisten en el estudio de la respuesta de células inmunes peritoneales a infecciones agudas así como e estudio del TA de ratones bajo dietas hipercalóricas. Finalmente, se presentarán resultados concernientes a la respuesta de SIRT6 frente a la administración de compuestos antiinflamatorios. Los resultados indican que SIRT6 aumenta su expresión en respuesta a estímulos proinflamatorios y al fenotipo secretor senescente, siguiendo el patrón de expresión de citoquinas proinflamatorias. Esta respuesta es inhibida en presencia de compuestos antiinflamatorios. Sin embargo, a pesar de existir un aumento en la expresión de SIRT6 durante la inflamación, observamos una inhibición en su actividad desacetilasa a nivel nuclear. Nuestros resultados in vitro e in vivo  sugieren que en respuesta a un estimulo proinflamatorio, SIRT6 se relocaliza intracelularmente, indicando un redireccionamiento respecto a su función clásica.    

Contacto: mbresque@pasteur.edu.uy
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| Póster | Oral - Si
NC886 es epigénicamente reprimido en el cáncer de próstata y actúa como supresor de tumor a través de la inhibición del crecimiento celular. (#0283)
Rafael Sebastián Fort Canobra 1; Murilo Geraldo 2; María Carolina Ottati 1; Alex Shimura Yamashita 2; Kelly Cristina Saito 2; Katia Ramos Leite 3; Manuel Mendez 4; Noemi Maedo 4; Laura Mendez 4; Beatriz Garat 1; Edna Teruko Kimura 2; José Roberto Sotelo-Silveira 5; María Ana Duhagon 1
1 - Facultad de Ciencias, L.I.M.. 2 - Depto. de Biologia Celular e do Desenvolvimento, Instituto de Ciências Biomédicas, USP. 3 - Laboratório de Investigação Médica en Urologia, LIM55, Departamento de Urología, Faculdade de Medicina, USP, Brasil. 4 - Departamento de Anatomía Patológica, Hospital Policial. 5 - Depto. de Genómica, Instituto de Investigaciones Biológicas Clemente Estable, MEC.
Resumen:
Nc886 es un transcripto de ARN no-codificante de 102 pb inicialmente clasificado como un precursor de microARN (Pre-miR-886), más tarde como un homólogo divergente de los vault ARNs (vtRNA2-1) y recientemente como un nuevo tipo de ARN no-codificante (nc886). La identidad de nc886/vtRNA2-1/Pre-miR-886 sigue siendo controvertida; se evidenció una regulación epigenética y función supresora de tumor y oncogénica en diferentes cánceres. Aquí presentamos por primera vez, el estudio de nc886 en el cáncer de próstata. La metilación del promotor de nc886 se encontró aumentada en el tumor frente al tejido prostático normal, así como en el tejido metastásico frente al tejido prostático normal. Adicionalmente, la metilación del promotor nc886 correlacionó con la clínica del cáncer de próstata, incluyendo recurrencia bioquímica, valor T clínico y score de Gleason. Observamos una disminución de nc886 en el tumor frente a tejido normal, concordante con el estado de metilación del promotor, y un aumento del mismo al ser tratado con agentes desmetilantes. De hecho, la metilación de nc886 mostró correlación con la expresión de DNMT3B. En estudios funcionales, la sobreexpresión de nc886 en DU145 condujo a una disminución en la proliferación celular in vitro debido a una acumulación de células en fase G2/M del ciclo celular, así como a una reducción del crecimiento celular in vivo en xenoinjertos de tumor en ratones NUDE. La expresión de nc886 mostró correlación con una firma de genes asociada a la progresión del ciclo celular en el cáncer de próstata. En resumen, nuestros datos sugieren un papel supresor de tumor para nc886 en la próstata, cuya expresión es epigenéticamente silenciada en el cáncer, conduciendo a un aumento de la proliferación celular. Nc886 podría presentar valor clínico en el cáncer de próstata dada su asociación con parámetros clínicos y con una firma génica clínicamente validada.

Contacto: rafaelfort20@gmail.com
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