Resumen:
Las rocas representan el principal refugio para la vida en algunos de los ambientes más extremos del planeta, como el antártico. Las comunidades microbianas que habitan el interior de las rocas se conocen como endolíticas. Estos microorganismos son capaces de colonizar grietas, poros y fisuras de las rocas así como modificarlas, directa o indirectamente, mediante procesos físicos y químicos. A escala global, estas interacciones afectan los ciclos de los elementos de la biósfera. Nuestro trabajo tiene como objetivo caracterizar la diversidad funcional de bacterias endolíticas antárticas, en concreto, en cuanto a los sistemas involucrados en la homeostasis de metales. Por otro lado, determinar la capacidad de las bacterias para producir pigmentos y evaluar si su síntesis está relacionada a la tolerancia a metales, como otro factor de protección frente a las condiciones del ambiente. Al momento hemos aislado e identificado 76 bacterias cultivables provenientes de dos muestras de rocas antárticas, identificadas como andesitas basálticas. Como se esperaba, el número de unidades formadoras de colonia fue de varios órdenes de magnitud menor que los obtenidos en otro tipo de muestras ambientales del lugar. Se encontraron representantes de Alpha, Beta y Gammaproteobacteria, Actinobacteria, Bacteroidetes, Cyanobacteria y Deinococcus-Thermus, de 22 géneros distintos. Asimismo, muchos aislamientos mostraron una baja identidad de secuencia con respecto a aquellas disponibles en las bases de datos públicas, lo que puede estar indicando la novedad de los microrganismos que colonizan este nicho. Además, detectamos aislamientos resistentes a Cu(II) 1mM, Mn(II) 3mM, algunos a Ni(II) y Zn(II) 1mM, Ag(I) 50μM y Co(II) 200μM, e incluso, los niveles de tolerancia de las bacterias se relacionaron con las abundancias de los distintos metales en las muestras de roca. Interesantemente, la mayoría de los aislamientos fueron pigmentados y casi todos estos pigmentos fueron identificados como carotenoides.

Contacto: v.carrasco02@gmail.com
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Resumen:
Las infecciones del tracto urinario (ITU) se encuentran entre las infecciones más comunes que afectan al ser humano. Entre los principales agentes etiológicos se encuentra Proteus mirabilis. Este patógeno está implicado en ITU complicadas, principalmente asociadas a la cateterización. P. mirabilis tiene la capacidad de formar biofilms, particularmente sobre superficies abióticas como catéteres. Diversos factores de virulencia están relacionados con la capacidad de formar biofilm incluyendo factores de adhesión, captación de hierro y movilidad, entre otros. El objetivo del trabajo fue evaluar el papel que cumplen genes relacionados con la virulencia y formación de biofilms en la capacidad de P. mirabilis de invadir células uroepitaliales y formar comunidades bacterianas intracelulares (CBI) como las descritas en Escherichia coli uropatogénica. Mutantes de una cepa patógena de P. mirabilis de origen clínico que exhibieron una capacidad alterada para formar biofilms fueron seleccionadas para su evaluación. Estas son defectivas para genes relacionados con adhesión (proteína fimbrial SteB y subunidad fimbrial mayor de la fimbria UCA),  sistemas de captación de hierro (ferritina y receptor Ton-B dependiente) y sistemas transportadores (PitA). Empleando células de vejiga humana T24, se realizaron ensayos de invasión con una MOI de 5 bacterias/célula, comparando con la cepa salvaje 2921. La cuantificación se realizó por recuento en placa. Aunque se observaron algunas diferencias en la capacidad de invasión celular de las mutantes con respecto a la cepa salvaje, estas no fueron significativas. Por otra parte, las mutantes fueron menos citotóxicas que la cepa salvaje presentando un mayor porcentaje de supervivencia celular. A partir de estos resultados se puede sugerir que los factores bacterianos implicados en la formación de biofilm de P. mirabilis no se relacionan con la invasividad celular y que existen otros mecanismos implicados en la misma.

Contacto: mgonzalez.iibce@gmail.com
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Resumen:
Las purinas son compuestos nitrogenados esenciales para la célula, componen ácidos nucleicos, algunos aminoácidos  y coenzimas, participan en el metabolismo energético (ATP, GTP) y son fuente de nitrógeno para muchos organismos. El transporte de purinas es mediado por transportadores sustrato-específicos. Todos los transportadores conocidos, desde bacterias a mamíferos y plantas, pertenecen a tres familias conservadas (NCS1, NAT/NCS2 y AzgA-like). El basidiomycota Phanerochaete chrysosporium tiene dos transportadores de purinas: PhU (NAT) y PhZ (AzgA-like). phU se regula transcripcionalmente como los homólogos caracterizados: se induce por sustratos y cuando estos son fuente de nitrógeno se induce además por carencia de nitrógeno y se reprime por amonio. En el caso de phZ a pesar de que sus sustratos son fuente de nitrógeno, la regulación del transportador parece estar ligada al anabolismo: es inducido por sustrato pero no por carencia y no es reprimido por amonio. Estas y otras diferencias lo hacen un candidato interesante para la caracterización funcional y estructural.   Las proteínas silvestres y mutantes expresadas en un mismo contexto genético, Aspergillus nidulans carece de transportadores propios fueron analizados: ubicación subcelular (fusión a GFP), crecimiento y transporte (uptakes competitivos con [³H]-hipoxantina). Los residuos a mutagenizar se seleccionaron mediante análisis comparativo de secuencias y modelado estructural por homología. PhZ transporta hipoxantina (Ki 0,2 μM); adenina, guanina y 8-azaguanina (80-90% de inhibición) y además es capaz de transportar xantina con equivalente porcentaje de inhibición. Mutantes de PhZ (L124M, T429P y A148) mostraron mayor resistencia al tóxico 8-azaguanina y otros (T131A) diferencias de localización subcelular. Concluimos que: PhZ es capaz de transportar xantina, diferenciándose funcionalmente de otras proteínas AzgA-like. L124, T429 y A148 interaccionan con el sustrato y T131 tendría una función relacionada a la regulación post-traduccional. PhU transporta los mismos sustratos que otros miembros NAT y determinamos que P456 es clave para su estructura.

Contacto: juli.dourron@gmail.com
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Resumen:
Varios estudios recientes reportan una red de comunicación bidireccional entre la microbiota del intestino (MI) y el sistema nervioso central. La MI en el adulto humano consiste mayoritariamente en bacterias y disrupciones en la homeostasis de la MI (disbiosis) han sido asociadas con diversas patologías y trastornos emocionales. Varios estudios han mostrado que la modificación de la MI por antibióticosen ratones provoca la aparición de comportamientos anormales en modelos animales de depresión y ansiedad. Sin embargo, un número limitado de estudios han examinado la relación microbiota-adicción. El objetivo de este trabajo fue comenzar a estudiar los efectos inducidos por el consumo de drogas de abuso, tales como la cocaína, en la estructura de la comunidad de la MI utilizando modelos animales que permiten fijar variables como dieta, tipo de droga y tiempo de consumo. Un grupo de ratas macho fue tratado durante 14 días con cocaína base (25 mg) volatilizada y administrada por inhalación pulmonar. Evidencias previas del laboratorio indican que cocaína base se vende adulterada con fenacetina y cafeína. Así, otro grupo de animales fue tratado con cocaína + fenacetina (25 mg) y cocaína + cafeína (25 mg) y con la combinación de los tres compuestos. Grupos control y tratados con fenacetina y cafeína volatilizadas fueron también incluidos. La materia fecal de los animales fue recogida luego de terminado el tratamiento y procesada para la extracción de ADN bacteriano. Análisis de fingerprinting basados en el espaciador intergénico del operón ribosomal (ITS) mostraron que los tratamientos indujeron cambios en la estructura comunitaria de la MI en relación a la estructura del grupo control, siendo éstos más evidentes con fenacetina. Aunque son necesarios más estudios para identificar las especies bacterianas afectadas, estos datos muestran un gran potencial para futuros estudios traslacionales en esta área emergente de la comunicación MI-cerebro.

Contacto: cpiccini@iibce.edu.uy
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Resumen:
Las infecciones causadas por Escherichia coli son uno de los mayores problemas sanitarios y económicos de los productores ganaderos mundialmente. Los patotipos E. coli enterotoxigénica y enteropatógenica se asocian a diarrea neonatal en terneros, mientras que E. coli enterohemorrágica y productora de toxina Shiga son importantes patógenos zoonóticos, siendo los bovinos su principal reservorio. La terapia antimicrobiana se utilizada para tratar enfermedades infecciosas. Lamentablemente, su uso indiscriminado se ha acompañado de un incremento en las resistencias, acarreando complicaciones en los tratamientos. Los antibióticos más comúnmente utilizados en animales son además ampliamente utilizados en la clínica humana y la transferencia de genes de resistencia a betalactámicos y fluoroquinolonas (FQ), debida a contaminación cruzada, es un problema cada vez más frecuente. Además, la creciente resistencia transferible a colistina ha emergido como una gran amenaza para la salud, ya que se utiliza en bovinos pero es de último recurso en infecciones multirresistentes en humanos. El objetivo de este trabajo consistió en evaluar los mecanismos de resistencia a antibióticos de E. coli de origen bovino y su papel como diseminadores de resistencia. El 36% de los aislamientos fueron resistentes a FQ y se constató la ocurrencia de multirresistencia. Se detectó la presencia de genes de resistencia a quinolonas qnrB2like y qnrS1 y se determinó resistencia a betalactámicos por betalactamsas de espectro extendido grupo CTXM14 y betalactamasas tipo AmpC. Por otro lado, se encontró el Integrón1 con arreglos que confieren resistencia a aminoglucósidos y trimetoprim. Finalmente, no se detectó la presencia del gen de colistina mcr1. La resistencia a antibióticos es un problema en la ganadería en Uruguay. E. coli de origen bovino puede jugar un papel importante en enfermedades en humanos, favoreciendo la trasferencia de resistencias inter-especies y obstaculizando los tratamientos. En este sentido, urge la implementación de la vigilancia en ambos ámbitos.

Contacto: aumpierrez@iibce.edu.uy
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Resumen:
La presencia de múltiples determinantes de resistencia a antibióticos en bacterias patógenas humanas es reconocida como una de las amenazas mas significativas a la salud pública. Aunque en ambientes naturales el rol principal de los antibióticos es el de servir como transductores en la comunicación e interacción entre microorganismos, la presión impuesta por su uso irracional, sea en el contexto clínico como productivo (a través de su empleo con fines profilácticos o como promotores del crecimiento animal), ha facilitado y promovido la selección, evolución, dispersión y proliferación de genes determinantes de resistencia a los mismos. Su dispersión y proliferación son además favorecidas por su localización en elementos mobilizables horizontalmente como ser plásmidos, transposones y sistemas de integrones. Estos últimos, estructuras modulares con el potencial de contener simultaneamente determinantes de resistencia a múltiples antimicrobianos. En este trabajo se analizaron aguas residuales domésticas y aguas residuales de un tambo experimental con el objetivo inicial de relevar la presencia de sistemas de integrones así como de determinantes genéticos de resistencia a antimicrobianos. Los resultados del mismo revelan la presencia en ambas matrices de integrasas de tipo 1 y 2 así como de integrones de clase 1 y 2. Asimismo, ensayos de PCR dirigidos a determinar la presencia de genes de resistencia a aminoglicósidos (aac, aph), β-lactámicos (bla_{CTX-KPC- OXA-TEM-VIM}), cloramfenicol (catA), trimetoprim (dhfrXII), macrólidos (ermF), streptotricina (sat), tetraciclina (tetL-M), vancomicina (vanA) así como a aminas cuaternarias (qacE-G) y mercurio (merA), en este caso por su potencial asociación a integrones clase 1, mostraron en ambas matrices con perfiles diferentes, productos de amplificación con los tamaños correspondientes esperados. Estos resultados preliminares remarcan la importancia del relevamiento ambiental de determinantes de resistencia a antimicrobianos así como la necesidad del aislamiento y la caracterización fenotípica y genómica de microorganismos portadores de integrones.

Contacto: Evehaller@gmail.com
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