Resumen:
A Leptospirose é uma importante zoonose, causada por bactérias do gênero Leptospira. Além de ser um problema de saúde pública, esta doença também causa perdas significativas na produção animal, principalmente associadas a problemas reprodutivos. As vacinas comercialmente disponíveis são constituídas de células inteiras inativadas (bacterinas), geralmente compostas pela combinação de 5 a 7 sorovares. Estas vacinas apresentam limitações, principalmente relacionadas ao espectro de proteção, já que há múltiplos sorovares patogênicos, e a vacina só confere proteção contra os sorovares contidos na preparação. Para contornar este problema, estudos que buscam identificar antígenos proteicos conservados e capazes de induzir resposta imune protetora estão sendo conduzidos. Nesta apresentação, serão relatadas as diferentes abordagens que estão sendo utilizadas para o desenvolvimento de novas vacinas. Estas abordagens incluem vacinologia reversa, vacinologia estrutural, vacinas de DNA, vacinas vetorizadas e vacinas de subunidade. As vantagens e desvantagens de cada uma destas abordagens serão destacadas, assim como os mais recentes avanços e as perspectivas futuras destas diferentes tecnologias.

Contacto: odir@ufpel.edu.br
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Resumen:
Las vesículas extracelulares (EVs), entre las que se distinguen los exosomas (EXOs) y las microvesículas (MVs), son importantes mediadores en la comunicación intercelular, y juegan importantes roles en la biología celular y la patología tumoral. Dado que son secretadas al torrente sanguíneo, y que contienen un conjunto de proteínas y ácidos nucleicos provenientes de las células de origen, presentan gran potencial en el diagnóstico clínico, dado que su análisis puede realizarse en biopsias líquidas mínimamente invasivas. Para ello se requiere del desarrollo de métodos analíticos confiables, rápidos, sensibles y económicos, aplicables al análisis descentralizado o el tamizaje de un gran número de muestras. En nuestro laboratorio hemos desarrollado un biosensor electroquímico con estas características, pudiendo detectar hasta 200 exosomas por microlitro de muestra (cerca de 1000 veces más sensible que métodos de ELISA comerciales), con un rango lineal que abarca cuatro órdenes de magnitud. El dispositivo consiste en un diseño del tipo sándwich, utilizando anticuerpos contra la proteína de superficie CD9 obtenidos en distintas especies, y un tercer anticuerpo conjugado a una enzima redox. El biosensor es altamente específico, distinguiendo exosomas de microvesículas en exceso de estas últimas, y es funcional en suero. Además, estamos desarrollando un segundo dispositivo basado en un principio diferente, que permitiría la detección de exosomas mediante el monitoreo de cambios de color. Esto resulta atractivo, pensando en la posibilidad de hacer un tamizaje de exosomas provenientes de células tumorales, que poseen marcadores de superficie específicos. En etapa menos avanzada que el otro, se presentará la síntesis, caracterización y derivatización de nanopartículas de oro, necesarias para esta segunda estrategia. En conjunto, esperamos obtener una serie de dispositivos analíticos versátiles, que permitan una detección rápida y económica de exosomas y otras partículas extracelulares, con aplicaciones tanto para el laboratorio básico como en diagnóstico y seguimiento de pacientes.

Contacto: pablymff@gmail.com
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Resumen:
La fasciolasis es una zoonosis de gran importancia en nuestro país, que afecta al ganado ovino y bovino, cuyo principal agente causal es la Fasciola hepatica por lo que existe una urgente necesidad de generar vacunas potentes para controlar esta enfermedad. Con la intención de dar respuesta a esta situación, realizamos formulaciones en base a saponinas y una proteína recombinante de este parásito denominada FhLAP. Las saponinas son compuestos glicosídicos anfipáticos de origen vegetal que han sido utilizados como adyuvantes, donde Quil A^® es la saponina comercial más utilizada. Recientemente nuestro grupo ha reportado por primera vez la formulación de ISCOMs con fracciones de Q. brasiliensis de la flora nativa como una alternativa a las saponinas de Quil A^®. Estas nanoformulaciones tipo caja de 40 nm promueven una fuerte respuesta humoral mixta (IgG1/IgG2a) y celular polarizada hacia un fenotipo Th1 (INFγ e IL-2), similar a la desencadenada por las formulaciones de Quil A^® pero con menores efectos secundarios (Cibulski, et. al. 2016). Este tipo de respuesta inmune humoral con altos niveles de IgG2a y celular tipo Th1 es la necesaria para controlar esta zoonosis. Aquí diseñamos un ensayo de vacunación en ratones utilizando diferentes formulaciones vacunales en base a saponinas de Q. brasiliensis y adyuvantes tradicionales. Los resultados preliminares indicaron que las formulaciones en base a saponinas (en solución o como adyuvantes particulados tipo ISCOMs) dispararon fuertes respuestas inmunes caracterizadas por altos títulos de anticuerpos similares a los adyuvantes más potentes del mercado, que a su vez se correlacionaron con una reacción de hipersensibilidad retardada (DTH) significativa con respecto al grupo control. Finalmente se evaluó la respuesta celular mediante inmunofenotipificación así como también la linfoproliferación a partir de esplenocitos estimulados con el antígeno y se determinó el perfil de citoquinas secretado (Th1/Th2/Th17).

Contacto: mrivera@higiene.edu.uy
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Resumen:
En Uruguay, las nematodosis gastrointestinales constituyen las principales infecciones que deterioran la salud animal y causan importantes perjuicios económicos en la producción ovina. Dichas pérdidas, sumado al surgimiento de resistencia a los antihelmínticos y a la presencia de residuos de los mismos en tejidos animales y en el ambiente, han llevado a la búsqueda de nuevas medidas de control de los nematodos gastrointestinales (NGI). El objetivo de este trabajo fue evaluar la actividad antiparasitaria in vitro de aceite esencial de Baccharis trimera (AE) sobre los estadios de vida libre de NGI. Se estudió el efecto sobre huevos y larvas obtenidos de materia fecal extraída del recto de ovinos infectados naturalmente  en predios agropecuarios particulares. Se realizó el test de eclosión de huevos en placas de cultivo celular de 24 pocillos dispensando 200 µl conteniendo 100 huevos/pocillo. Se adicionaron 200 µl/pocillo de diferentes concentraciones de AE. Para ello se prepararon diluciones seriadas de AE en PBS+1% DMSO. Como control positivo se usó 200 µl/pocillo de Ricobendazol (12,5 mg/ml), como control negativo  200 µl/pocillo de PBS+1% DMSO. En el test de motilidad larvaria las placas se siembran con 50 larvas en 200 µl/pocillo y se adicionan 200 µl/pocillo de cada dilución de AE  en PBS+1% DMSO. Como control positivo 200 µl/pocillo de Levamisol (2 mg/ml) y 200 µl/pocillo de PBS+1% DMSO como control negativo. Se realizaron triplicados en cada tratamiento. Las placas se incubaron a 27°C en cámara húmeda durante 72 h y 48 h, respectivamente. Se observó efecto dosis respuesta en ambos test. El IC50 fue del 4,93% en eclosión de huevos, siendo el IC50 de 16,77% para motilidad larvaria. AE de  Baccharis trimera fue más efectivo como ovicida que larvicida. 

Contacto: piasolaro@hotmail.com
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Resumen:
Los anticuerpos humanos o humanizados son los fármacos con mayor potencial para combatir cáncer y enfermedades autoinmunes en pacientes en la actualidad, siendo su altísimo costo el principal obstáculo para acceder a éstos. El objetivo general de este trabajo es desarrollar una estrategia que permita utilizar los anticuerpos en circulación propios del organismo como inmunoterapia, mediante el uso de nanobodies biespecíficos. Los nanobodies son fragmentos del dominio variable de la cadena pesada de anticuerpos de llama que reconocen al antígeno. Estos carecen de funciones efectoras y a su vez presentan la desventaja de que son rápidamente eliminados por los riñones debido a su pequeño tamaño (11-15 Kd aproximadamente). Ambas desventajas serían eliminadas mediante el desarrollo de nanobodies biespecíficos en el cual un fragmento se une a inmunoglobulinas con funciones efectoras y el otro a la molécula blanco. El primer objetivo específico planteado, fue el de desarrollar nanobodies anti-IgG2a e IgG2b de ratón (isotipos con funciones efectoras) y fusionarlos genéticamente a un nanobody específico para una molécula modelo (toxina tetánica), a ser eliminada de la circulación mediante esta estrategia. Para esto se  construyó una biblioteca de nanobodies de llamas inmunizadas con anticuerpos IgG2a e IgG2b de ratón en el bacteriófago M13. Posteriormente se realizaron rondas de selección mediante “Phage Display” y se seleccionaron nanobodies específicos para IgG2a e IgG2b. Se obtuvieron nanobodies específicos para IgG2a, IgG2b y otros que presentan reactividad cruzada con IgG1 y/o IgG3. Las secuencias de ADN codificantes de los nanobodies específicos para IgGs de ratón se transfirieron “en masa” y se clonaron en un vector de expresión como fusión a un nanobody neutralizante y específico para un fragmento de la toxina tetánica. El próximo paso es realizar pruebas con estos nanobodies biespecíficos en ensayos de desafío con toxina tetánica en ratones.

Contacto: ceci_lourdes_5595@hotmail.com
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